结核分枝杆菌相关检测项目
近期，医院检验科针对结核分枝杆菌开展了3个新项目。
一结核感染T细胞斑点试验
医嘱名称：结核感染T细胞斑点试验（T-SPORT）
代码：H
费用：元
标本及标本量：4-5毫升肝素抗凝血，不能少于4毫升，及时送检，从采血到分装到试验管中的时间不能超过4小时。
检测时间：每周三上午。其余时间可接受标本。
报告结果解释
基础水平：即空白对照管。用于修正背景、异嗜抗体效应、血液中非特异γ-干扰素影响。
刺激水平：即结核抗原管（待测管），结核抗原管的γ-干扰素含量。
结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测：刺激水平值减基础水平值（即结核抗原管的γ-干扰素含量减空白对照管的γ-干扰素含量）。若刺激水平值明显高于基础水平值，则视为实验结果阳性。
结核分枝杆菌阳性对照反应：即阳性对照管，若该反应弱（0.5IU/mL），且对结核抗原（即刺激水平）呈阴性反应时，表示结果不确定。原因可能：①淋巴细胞不足②病人的淋巴细胞无法产生γ-干扰素③样本处理不正确导致淋巴细胞活力低④阳性对照管采血或混合不当。
阴性：高结核发病地区，免疫功能正常人群；无可靠依据诊断结核病时，结核病应列在其他疾病之后；
阳性：①对既往有结核感染史（治疗或未治疗）或有明确的结核病证据者（钙化淋巴结、肺内典型的钙化或陈旧结核病灶），但无结核症状，QFT为阳性者，表明机体曾经患过结核病，不能代表目前为活动性结核病，也不能根据阳性检测数值的高低判断结核病病情不确定性：不能确定是否存在结核感染T细胞免疫反应；或提示患者免疫力受损；②或提示患者有其他炎症反应干扰；或提示病人T细胞对阳性对照管PHA无淋转反应，无法产生γ-干扰素；③临床上有典型的结核病症状，影像学等检测支持结核病的诊断且排除其他疾病的患者，QFT阳性支持活动性结核病的诊断；④临床上有典型的结核病症状，但以目前临床诊断手段未发现结核病患病证据，且排除其他疾病的患者，QFT阳性支持MTB感染的诊断，建议试验性抗结核治疗；避免卡介苗、非结核分支杆菌干扰，提高灵敏度！
备注：诊断或排除结核病及评估是否有结核感染的可能性时，需结合流行病学、病史、医学和其他诊断结果一起考虑。
二自动细胞离心涂片抗酸染色镜检
医嘱名称：自动细胞离心涂片抗酸染色镜检
或前缀为结核集菌的套餐项目，如下图
(为方便输入，医嘱输入“JH”、“JHTP”、“KSRS”即可找到项目。分别为结核，结核涂片，抗酸染色首字母)
费用：元
标本：晨痰（非口水，肺部深处痰），肺泡灌洗液，脑脊液，组织，分泌物，胸腹水，尿液，关节液等。
标本量：3毫升左右，不低于1毫升。因试验要用到整份标本离心，标本量与阳性率相关，尽量取多。
?痰液：晨痰，3-5mL，漱口后留取，要求无食物残渣。痰液较少的话，可留取几天标本混合，前提是标本需4度保存。
尿液：晨尿。
组织与分泌物：量至少为1mL，棉拭子上粘取的少量标本不利于检测。
检测时间：周一至周五，其余时间可收标本。
三结核XpertMTB/RIF技术
医嘱名称：结核分枝杆菌菌种生物芯片筛查
结核分枝杆菌耐药基因生物芯片检测
两个项目需要同时开。
医嘱代码：H
H
费用：元
标本：晨痰（非口水，肺部深处痰，明显血痰不能检测），脑脊液，组织。
标本量：大于1毫升，棉拭子上粘取的少量标本不利于检测。尽快送检，若不能及时送检，4度冷藏保存。
检测时间：周一至周五。其余时间可收标本。
XpertMTB/RIF试验作为一种全自动核酸扩增技术，从分子水平检测结核杆菌，同时能够检测利福平耐药基因。以半巢式荧光定量PCR技术为基础，以MTB对利福平耐药的相关基因ropB为靶基因，使用六重定量PCR对痰液中的MTB进行检测。该方法操作简单，2h内即可读取检测结果。为WHO推荐方法。属国际先进技术。
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项目介绍详细版
截止年8月，全球的结核病新诊断技术整体研发和应用进展，可分为以下几类：
1.WHO推荐的新技术：
（1）分子检测技术：包括两种技术，为可以检测肺结核、肺外结核和儿童结核的XpertMTB/RIF技术，和可以检测结核分枝杆菌和利福平耐药的线性探针技术。
（2）显微镜检查技术：包括光学和半导体发光二极管显微镜检查技术、当日诊断技术。
（3）以培养为基础的技术：包括商业化的液体培养系统和、非商业化的培养和DST技术（MODS、NRA和CRI）。
2.WHO已评估、但尚未推荐的新技术：
血清学诊断技术、γ-干扰素释放试验。
3.已上市、但WHO未进行评估的新技术：
主要是分子技术：包括iCubate系统（美国）、TB耐药检测（Capital生物公司，中国）、EasyNATTB诊断试剂盒（中国）和Truelab/TruenatMTB（印度）。
这些新技术中本院检验科已开展了XpertMTB/RIF技术和γ-干扰素释放试验。
一γ-干扰素释放试验
试验原理：干扰素-γ主要由MTB抗原活化的效应T淋巴细胞产生。MTB感染者的效应T淋巴细胞，受到MTB特异抗原早期分泌靶蛋白ESAT-6(early-secretedantigenictarget-6)和培养滤液蛋白CFP-10(culture
filtrateprotein-10)刺激后可分泌干扰素-γ。通过酶联免疫斑点试验（ELISPOT）或者酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法对所分泌的干扰素-γ进行定量检测，从而判断机体内是否存在对MTB反应的效应T细胞，对MTB感染进行辅助诊断。被用于结核病或结核潜伏感染诊断。由于效应T细胞存活时间很短，且具有特异性，因此可作为机体是否处于被感染的指标，无论是否有临床症状。
T-SPOT使用的为ELISPOT方法，本科室开展的QFT（QuantiFERON-TB，美国FDA批准）使用的为ELISA方法，是目前全球结核感染检测特异性最高的试剂之一。QFT试验已于年12月获美国FDA批准用于临床,并在美国CDC的最新指南中被推荐作为一种替代结核菌素试验的检测方法，FDA在批准函中指出：QFT是结核分枝杆菌感染(包括疾病)的间接检测方法，可与危险因素评估、放射学检查和其它医学或诊断方法联合应用;T-SPOT.TB试验在欧洲国家获准使用,作为结核菌素试验的辅助诊断方法。
临床诊断性能：
特异性：只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分支杆菌和卡介苗无交叉反应。特异性高达99.0%，
灵敏度：在80%以上。肺外结核患者中也有很高的检出率。
阳性结果解读：
阴性结果解读：
特点：
1检测特异性高达99%。
2全血孵育并直接检测γ-干扰素，真实反映人体结核感染的免疫状态。
3包被三种特异性抗原，与卡介苗及绝大多数NTM无交叉反应。
4不受既往BCG接种影响。
5包含对照，结果准确可靠。
6大幅度提高结核感染的检出能力，尤其可用于涂菌阴肺结核的辅助诊断。
7使用血液标本，可用于肺内和肺外结核检测，并发现早期感染者。
8阴性预测值很高，可用于排除结核感染。阳性预测值约为80%，不能用于结核的确诊。
9不能区分是活动性和潜伏性结核。
10对于原发感染初期或免疫低下人群，可能存在假阴性。
具体应用：
二XpertMTB/RIF技术
XpertMTB/RIF试验作为一种全自动核酸扩增技术，从分子水平检测结核杆菌，同时能够检测利福平耐药基因。以半巢式荧光定量PCR技术为基础，以MTB对利福平耐药的相关基因ropB为靶基因，根据其81bp的核心区设计5条相互重叠的探针，同时根据球芽胞杆菌（Bacillusglobigii）基因组设计1条内参探针，使用六重定量PCR对痰液中的MTB进行检测。该方法操作简单，2h内即可读取检测结果。
世界卫生组织有证据确凿的数据支持广泛应用XpertMTB-RIF来诊断结核和利福平耐药结核。因此建议：
1）对疑似多耐结核或HIV相关结核患者的最初诊断应采用XpertMTB/RIF试验，而不是传统的显微镜检查、培养和药敏试验（强烈推荐）；
2）在多耐结核和/或HIV低发地区，XpertMTB/RIF试验可作为镜检的后续试验，特别是涂片阴性的标本（非强制性建议，承认主要是资源的影响）。
特点：
1敏感性与特异性高。对MTB特异，敏感性与培养相似。
2通过ropB基因检测利福平耐药。
3增加检测次数可能增加敏感性，但需考虑费用。
4由于结核病患儿体液标本的细菌载量低，病原学培养阳性率及痰涂片阳性率低。因此也适用于儿童。
5不能替代传统涂片，培养，药敏。
6痰液，脑脊液，组织除外的标本缺乏临床依据。
上海公共卫生中心临床中心结核科在《精准医学与结核病临床诊治》中也推荐了XpertMTB/RIF技术。
三自动细胞离心涂片抗酸染色
直接涂片法、培养法为WHO金标准。直涂法缺点是阳性检出率低，生物安全性差；培养法缺点是时间长，要4-6周出结果.
自动细胞离心涂片抗酸染色镜检（夹层杯法）：为金标准直涂法的改良和创新，阳性检出率明显提高，生物安全性好。
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